2025年9月20日 ，長春獸醫研究所扈榮良團隊在《Emerging Microbes & Infections》上發表了題為" Deletion of the African swine fever virus E120R gene completely attenuates its virulence by enhancing host innate immunity and impairing virus release "的學術論文。
本次研究通過同源重組技術，用含p72啟動子和mCherry的報告基因盒替換ASFV SY18的E120R基因，轉染骨髓來源巨噬細胞(BMDMs)后，結合熒光篩選與有限稀釋法分離重組病毒ASFV-ΔE120R，再經艾特森LDS-L2型超濾設備去除宿主細胞碎片純化病毒。
研究背景
非洲豬瘟病毒(ASFV)致家豬致命性出血病，威脅全球養豬業，目前無有效商用疫苗或藥物?，F有減毒活疫苗存在毒力返強、病毒排毒風險，影響臨床應用。鑒于E120R基因功能未明確且此前構建其缺失株未果，本研究以高致病性Ⅱ型SY18株為基礎，構建E120R基因缺失重組病毒ASFV-ΔE120R，探究E120R基因功能，評估該缺失株的減毒特性、安全性、免疫原性及對親本病毒的保護效力，為非洲豬瘟疫苗研發提供新靶標與候選株。
1. 實驗過程
圖例1：siGSDMD-LNPs的制備流程及膿毒癥緩解機制示意圖
2. ASFV-ΔE120R的構建驗證與體外復制能力分析
研究團隊通過PCR、測序和Western blot證實E120R基因被成功敲除；生長曲線顯示該缺失株在豬肺泡巨噬細胞中的復制能力顯著低于野生株。
圖例2：ASFV-ΔE120R的構建驗證與體外復制能力分析
3. ASFV-ΔE120R感染細胞的異常形態觀察
研究團隊進一步通過透射電鏡發現：缺失株感染細胞24小時出現異常管狀結構，48小時陽性細胞占比達84%，而野生株無此結構，說明E120R的缺失會破壞病毒粒子的正常形態。
圖例3：ASFV-ΔE120R感染細胞的異常形態觀察
4. E120R缺失對病毒粒子釋放能力的影響
研究團隊在電鏡結果上未觀察到缺失株的出芽過程，但病毒滴度檢測結果顯示，24-48小時內缺失株上清液病毒滴度比野生株低1-2個log??TCID??/mL，證實其病毒釋放能力受損。
圖例4：E120R缺失對病毒粒子釋放能力的影響
5.ASFV-ΔE120R對康復豬血清的敏感性檢測
熒光顯微鏡、病毒滴度及基因組拷貝檢測結果顯示，康復豬血清可顯著抑制缺失株的復制，而對野生株和ASFV-ΔI267L無明顯作用，說明缺失株的抗原表位暴露狀態發生改變，更容易被康復豬血清中的抗體識別并中和。
圖例5：ASFV-ΔE120R對康復豬血清的敏感性檢測
6. ASFV-ΔE120R激活宿主抗病毒免疫的分子機制
RNA測序熱圖顯示，缺失株感染后趨化因子、干擾素刺激基因等抗病毒基因表達顯著上調；GO和KEGG富集分析表明差異基因富集于固有免疫和炎癥信號通路上。
圖例6：ASFV-ΔE120R激活宿主抗病毒免疫的分子機制
7. ASFV-ΔE120R體內安全性及無病毒殘留驗證
研究團隊進一步驗ASFV-ΔE120R體內安全性，研究發現免疫仔豬的組織病理切片無非洲豬瘟典型病變；qPCR和細胞培養未檢測到組織中的病毒核酸和活性病毒，證明該毒株在體內無法復制和殘留。
圖例7：ASFV-ΔE120R體內安全性及無病毒殘留驗證
8. ASFV-ΔE120R的體內安全性與免疫原性評估
隨后，研究團隊對免疫仔豬體內免疫原性進行評估，實驗結果表明：28天觀察期內體溫正常、無臨床癥狀、無病毒排毒；ELISA實驗顯示加強免疫后所有仔豬產生p54特異性抗體；ELISpot證實其可誘導IFN-γ分泌型PBMC應答。
圖例8：ASFV-ΔE120R的體內安全性與免疫原性評估
9. ASFV-ΔE120R對親本毒株攻毒的保護效果分析
研究團隊發現，對5頭免疫豬進行攻毒實驗，其中2頭存活，存活豬無明顯臨床癥狀、組織無病毒核酸，抗體水平和 IFN-γ 分泌細胞數量顯著升高，CD8?IFN-γ? T 細胞比例上調。
圖例9：ASFV-ΔE120R對親本毒株攻毒的保護效果分析
10. ASFV-ΔE120R 免疫減輕攻毒后組織病理損傷
野生株對照組出現嚴重器官出血、壞死；存活免疫豬僅扁桃體輕微淋巴細胞壞死，其他器官無病理異常，組織病理評分顯著低于對照組。
圖例10：ASFV-ΔE120R免疫減輕攻毒后組織病理損傷
知識分享：研究亮點
1 本研究以高致病性Ⅱ型非洲豬瘟病毒SY18株為基礎，首次成功構建E120R基因缺失重組病毒ASFV-ΔE120R，突破此前E120R基因被認為可能對病毒復制至關重要的研究認知，明確其非必需性及作為疫苗靶標的潛力。
2 采研究發現ASFV-ΔE120R通過形成異常管狀結構、顯著降低病毒粒子釋放能力實現完全減毒，且能更強激活宿主固有免疫(如上調趨化因子、干擾素刺激基因表達)，同時在免疫豬體內無病毒排毒，解決傳統減毒疫苗排毒及毒力返強的關鍵問題。
3 動物實驗證實ASFV-ΔE120R安全性良好，可誘導體液與細胞免疫應答，對親本病毒SY18攻毒提供40%保護率，為非洲豬瘟安全高效減毒活疫苗研發提供新靶標與候選株。
參考文獻：
Emerging Microbes & Infections ( IF 5.5 ) Pub Date : 2025-09-20, DOI: 10.1080/22221751.2025.2555722.
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